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细菌性疾病导致鱼肉芽肿

韦斯·鲍姆加特纳,DVM,副总裁。交流电 约翰·霍克博士

多种染色方法识别病原体

肉芽肿
po参感染引起的脾脏肿大 诺卡氏菌。在左侧,白色的精确病灶指示疾病的早期阶段。右图反映了晚期肉芽肿性脾炎。照片由H. Lan提供。

养殖鱼类维持健康最熟悉的方面之一是慢性疾病,特征在于一个或多个器官中存在白色或棕褐色结节。此类结节是由于组织中的慢性炎症所致,其中一种巨噬细胞(一种白细胞)聚集在称为肉芽肿的种群中。

肉芽肿具有传染性和非传染性原因,外观可能有所不同,并且具有与免疫功能密切相关的自然病史。简而言之,它们是人体隔离和消除不良物质的一种手段,但是肉芽肿的存在程度部分取决于人体成功地控制了犯罪分子。

肉芽肿性炎症

对于健康的鱼类,其内部器官通常会出现1至2至1毫米宽的肉芽肿。这些肉芽肿通常是由于寄生虫或非感染性物质引起的。

但是,患病鱼中的许多肉芽肿是细菌感染的特征,例如分枝杆菌,诺卡氏菌和弗朗西索氏菌。这些肉芽肿可被视为球形的,湿的器官南瓜制备物中的黑色素结构。

在肉芽肿性疾病的任何情况下,建议通过光学显微镜检查用苏木精和曙红染色的固定组织切片,以验证微生物学结果并确定是否存在多种病原体。

分枝杆菌

分枝杆菌可以说是鱼类肉芽肿病的最常见和众所周知的原因。它们会影响淡水和咸水种类,所有鱼类均应视为易感鱼类。

分枝杆菌是形成多形杆,细丝或球菌的革兰氏阳性耐酸细菌。直到最近十年,只有少数物种(螯虾福特M.(例如)被确定为鱼类病原体,但是随着物种形成方法的改进,该列表也有所扩展。 海水分枝杆菌 它是一种快速生长的物种,通常是从病鱼中分离出来的一种,在特定的固体培养基中可在7到14天内生长,而其他物种则可能需要几个月的时间才能实现菌落生长。

重要的是要理解,如果没有从患病的组织中获得培养物,则不能排除分枝杆菌是病原体。分枝杆菌的分离以及病变中肉芽肿和耐酸细菌的存在可能没有很好的相关性。谨慎保存冻结和 用于聚合酶链反应测试和组织病理学的固定组织,以巩固诊断。

疾病迹象

患病鱼表现出各种外部症状,从溃疡,眼球突出和消瘦到嗜睡,可见肉芽肿或根本没有迹象。尽管有急性死亡的报道,但病程通常是慢性的。

在内部,灰色,棕褐色或白色病灶存在于任何器官中,但通常是脾脏,肝脏或肾脏。病灶可能会合并,导致炎症部分或全部置换器官。

显微镜下,在患病鱼中可以看到由淋巴细胞和纤维细胞聚集的巨噬细胞聚集体组成的典型肉芽肿。肉芽肿可能具有坏死核心,通常会在特征性阶段成熟,并伴有进行性纤维化。可识别细菌的存在是高度可变的,并且在许多情况下,使用特殊的染色剂对其进行可视化。

肉芽肿
罗非鱼头部肾脏的典型肉芽肿感染 亚洲弗朗西斯菌。较暗的核心由被巨噬细胞围绕的死细胞物质,黑色素和细菌组成。

组织污渍

分枝杆菌最著名,最常用和最方便的组织染色是“耐酸”染色,但也可以使用荧光和基于免疫的组织染色。在分枝杆菌意义上的耐酸牢度是细菌抵抗3%酸性酒精脱色的能力。重要的是要认识到这种染色剂不是特异性的,因为诺卡氏菌和杜鹃花球菌也可以是耐酸的。此外,耐酸牢度不敏感。在某些情况下,不到1%的分枝杆菌可以耐酸。

由于固定方法,染色方法,具有完整细胞壁的分枝杆菌的存在,细菌壁中霉菌酸的类型和数量以及细菌的生长阶段,因此酸坚牢度的变化范围很广。从分枝杆菌病的病例中,在组织玻片中发现很少甚至没有耐酸细菌并不罕见。

耐酸牢度的Ziehl-Neelsen染色可能是诊断固定组织中分枝杆菌的最常用和报告的技术。但是,这种染色程序尚未标准化,并且有许多变化,因此在使用染色剂时应具体报告方法。

许多人建议使用高碘酸作为氧化剂来改善组织切片中的酸坚牢度,但是这种治疗从分枝杆菌特异性的角度改变了细菌的性质。虽然高碘酸可通过耐酸染色改善细菌染色,但它也使Ziehl-Neelsen(Z.N.)染色在疾病暴发中对分枝杆菌和诺卡氏菌的诊断无用。

肉芽肿
这种高度放大的肉芽肿中含有耐酸的分枝杆菌,可染成亮粉色/红色。巨噬细胞复染为紫色。

诺卡氏菌

诺卡氏菌是革兰氏阳性,耐酸性较弱的分支杆细菌,会影响淡水和咸水物种。 诺卡氏小行星, 猪笼草沙门氏菌 是最常见的分离株。他们可能需要多达三周的时间才能在25摄氏度的固体培养基中生长。培养菌落中支气管菌丝的存在是特征。

诺卡氏菌引起的疾病的临床体征类似于分枝杆菌病。诺卡氏菌通常被认为是耐酸的,但这在很大程度上取决于所采用的染色方法。修改后的Z.N.污渍使用无机酸而非酸性酒精,可能更有效。此外,标准Z.N.为3%的酸性醇。脱色剂,通常会使诺卡氏菌脱色。如果使用1%的酸性酒精,如某些商业Z.N.污渍,诺卡氏菌保留污渍。

弗朗西斯拉

弗朗西斯菌被认为是哺乳动物病原体已有近一个世纪的历史。但是,直到最近它们才被鉴定为养殖鱼类中的重大疾病。

弗朗西斯氏菌在鱼类疾病暴发中已与类似立克次氏体的生物相混淆,而将两者区分开是有问题的。 诺坦弗朗西斯菌亚洲细果 在越来越多的鱼类(包括鳕鱼,罗非鱼,咕unt鱼,鲑鱼,丽鱼科鱼和混合条纹鲈鱼)中已被确定为新兴病原体。

它们是革兰氏阴性球菌,感染巨噬细胞,在许多组织中引起特征性肉芽肿。这些细菌不会在简单的培养基中生长,而且即使从明显患病的标本中也常常难以分离。由于它们生长缓慢-需要五到七天才能显示可见的菌落-细菌污染了弗朗西菌的过度生长是一个问题。建议使用选择性介质进行主隔离。作者使用的选择性培养基是通过将50 µg / mL氨苄青霉素和100单位/ mL多粘菌素B添加到以牛血红蛋白强化的半胱氨酸心琼脂中制成的。

亚洲细果,它在养殖的罗非鱼中引起严重且广泛的肉芽肿病,最初表现为坏死性肌炎,导致加工厂的鱼片定罪。肉芽肿病主要影响鱼的头部肾脏,脾脏和肝脏。低于28摄氏度的水温极大地影响了疾病的爆发,而且病害的进展相对较快。

在巨噬细胞中,在许多情况下,存在着0.5至1 µ宽的可可杆菌。细菌不是耐酸性快的细菌,最容易在Giemsa染色剂中看到,但是标准的苏木精和曙红染色剂也能很好地工作。

(编辑’注意:本文最初发表于2011年7月/ 2011年8月的印刷版中。 全球水产养殖倡导者。)