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商业阳光鲈鱼孵化场的鸡蛋败血症

戴维·施特劳斯博士 布拉德利D.辛西娅·莱德贝特(Cynthia K. 本杰明·贝克博士 里克·威廉姆斯;迈克·克拉克;迈克·弗里兹

利用硫酸铜制定了控制制度

阳光低音
大多数混合条纹鲈鱼的养殖操作都使用阳光鲈鱼,即雌性白色低音和雄性条纹低音之间的杂交。

 

大约30年前开始的大多数水产养殖生产混合条纹鲈鱼的工作,现在都使用阳光鲈鱼,即雌性白色鲈鱼和雄性条纹鲈鱼之间的杂交。雌性亲鱼通常注射人绒毛膜促性腺激素以诱导卵的最终成熟和排卵。第二天早晨,对雄性和雌性进行带卵产卵,以生产受精卵。将鸡蛋移至麦当劳孵化罐中,然后将其暴露于单宁酸溶液中几分钟,以抑制粘连(即结块)。卵在流水中孵化,通常在48小时内开始孵化。

最佳孵化场管理程序对于成功生产阳光鲈鱼幼虫至关重要。卵温育过程中的一个重要问题是真菌的生长(即 腐烂症 spp。),可以捕获或杀死健康的鸡蛋,而死的或分解的鸡蛋会加剧真菌问题。美国食品药品监督管理局(FDA)批准的唯一用于控制蛋真菌的化合物是37%的福尔马林和35%的过氧化氢。

真菌生长
在鱼卵孵化过程中,真菌的生长是一个重大问题。

但是,硫酸铜(CuSO4)多年来一直被用作水性治疗剂,以控制商业和休闲鱼池中的原生动物寄生虫和冬季杀灭剂,以及对使用CuSO的调节作用4 已推迟,等待正在进行的研究结果的获得,以分别获得FDA批准的通道channel鱼和通道eggs鱼卵鱼鳞病和腐烂病标签。因此,目前可以将其用作治疗剂。

在我们的研究中–这里是原始出版物的摘要(北美水产养殖杂志 78:243–250,2016)–我们进行了一项体外实验以确定CuSO的浓度4 可以控制培养基上真菌的生长,然后进行急性毒性实验来确定阳光鲈鱼幼虫的安全和致死浓度。我们还在商业阳光鲈鱼孵化场进行了一项实验,以确定理想的CuSO处理浓度4 控制阳光鲈鱼卵的腐烂症。

孵化实验
Keo Fish Farms,Inc.的孵化实验

实验装置

实验在美国阿肯色州斯图加特的斯图加特国家水产养殖研究中心(SNARC)和位于阿肯色州Keo的商业阳光鲈鱼生产商Keo Fish Farm进行,在孵化季节开始时,需使用真菌进行体外实验是从Keo Fish Farm的麦当劳孵化罐(n = 3)中的鸡蛋中分离出来的。在SNARC,对真菌进行培养,然后将样品鉴定为 腐皮草。 来自Keo鱼场的新鲜井水也被转移到SNARC,用于实验。

有关详细步骤,请参阅原始出版物。对于体外实验,我们在六孔平底细胞培养板中开发了一种新型的体外测定法,以测试CuSO的有效性4。我们在SNARC进行了第二项实验以确定CuSO的毒性4 到阳光下的鲈鱼幼虫。生物测定在1升塑料容器(顶部直径10厘米,底部直径9厘米×高13厘米)中进行,该容器装有500毫升Keo Fish Farm水。每个容器装有10只孵化后≤24小时的阳光鲈鱼幼虫。实验是在静态条件下进行的,每隔48小时记录一次死亡率。有10种浓度的CuSO 4 和未处理的对照(n = 3次/次,包括对照)。 CuSO的标称浓度4 范围从0.125到64 mg / L,选择在48小时内产生0%到100%的死亡率。

硫酸铜的实验结果

Keo养鱼场水的重要化学特性-在研究Cu毒性和有效性时必不可少-包括pH = 7.9,碱度= 216 mg / L(以CaCO 33),硬度= 266 mg / L(以CaCO计)3),溶解的有机碳= 1.05 mg / L。

用于这项研究的体外测定非常适合用作确定化合物在具有不同化学或有机含量的各种水中的有效性的初始步骤。因此,使用了Keo鱼场的水。实验是在20摄氏度下进行的,这是有效性实验的大致温度。如我们在SNARC所见,未经处理的对照表现出正常的真菌生长。

体外实验
体外实验-注意0和10 mg / L处理中的生长。

10 mg / L的CuSO减少了这种生长,但不及20 mg和40 mg / L的CuSO4 治疗了。使用20 mg / L CuSO可以在48小时内最大程度地减少真菌4。所有CuSO4 治疗与对照组有显着差异(P< 0.001).

平均LC50 阳光鲈鱼幼虫在24小时和48小时时的值分别为5.4(95%CI = 4.5-6.4)和3.9 mg / L CuSO4 (95%CI = 3.3-4.6)。 NOEC值为0.5 mg / L CuSO4 持续24 h和0.25 mg / L CuSO4 持续48小时。每种处理的平均死亡率百分比列于表1。在实验之前或实验期间不喂食幼虫,因为喂食会对水质产生负面影响并提供潜在的Cu结合位点,导致较低的毒性浓度。毒性试验中的水质变量是可以接受的;实验结束时的总氨氮为0.14±0.04 mg / L(平均值±SD); pH为7.8。平均溶解氧水平和水温分别为89.3±4.8%和23.0±0.1°C。

硫酸铜(mg / L)死亡率(%)1h死亡率(%)2h死亡率(%)3h死亡率(%)4小时死亡率(%)8小时死亡率(%)24小时死亡率(%)48h
0.1250000000
0.250000000
0.50000003.3
1.003.33.36.76.71010
2.0003.33.33.31010
4.03.33.36.76.71013.330
8.03.33.3101016.773.3100
16.01016.726.73043.3100100
32.023.34063.38093.3100100
64.04080100100100100100

 

在有效性实验中,每个孵化室中的卵量为108.7±4.5 mL(平均数±SD),通过XPC枚举器(使用预编程算法来关联通过容器中生物总数的受体)。 DO和温度分别为93.7±2.7%饱和度和19.2±0.1摄氏度,通过孵化室的流量为1.15±0.15 L / min。

菌
在麦当劳孵化罐中被真菌(左)和正常,健康的鸡蛋(右)感染的鸡蛋。

鸡蛋在预期的48小时内孵化。未经处理的对照中的真菌严重,接受10 mg / L CuSO处理的真菌在视觉上较少 4 或更高。表2显示了四次重复对比三次重复的最小均方孵化率。线性回归用于解释CuSO4 卵子存活率的治疗率; n = 4时存活百分比的等式是22.55 + 0.597×治疗率(F = 22.47,P = 0.0008),n = 3时是28.71 + 0.659×治疗率(F = 18.39,P = 0.0034)。基于这些方程式的每种处理率的预测值也显示在表2中。最佳存活率是40 mg / L CuSO4 (存活率50.5%);但是,20 mg / L CuSO4 治疗(45.8%的存活率)在统计学上相似,因此在使用CuSO时可提供更大的安全裕度4.

在另一个实验中,阳光鲈鱼卵用20 mg / L CuSO处理4 并在15和30分钟,1、2、4和12小时取样(每处理n = 2次重复)。处理前和处理后30 s对水样品(n = 2)的分析表明,其浓度分别为0.0和3.6±0.49 mg / L Cu。处理后水中铜的浓度较低(占所计算的铜的70.7%)是由于鸡蛋立即摄取了铜所致。处理前鸡蛋中的浓度为2.95μg/ g铜;治疗期间的范围是54.0-67.3μg/ g铜。这表明铜被吸收在绒毛膜中,并且在控制鸡蛋上的真菌时可能会产生延长的作用。应该设计将来的实验来解决这个问题。

硫酸铜(mg / L)%实际生存率n = 4%实际生存率n = 3预测生存百分比n = 4预测生存百分比n = 3
024.0±9.0年27.7±6.4倍22.628.7
1031.2±9.0年31.4±9.0年29.134.7
2036.6±21.1时45.8±13.0时35.740.6
4049.1±3.9英寸50.5±3.3英寸48.952.6

 

作为警告措施,使用CuSO处理过的阳光鲈鱼卵和幼虫4 在生长至7.6厘米(3英寸)的过程中,定期观察是否存在畸形或其他可能的健康问题;与未经处理的鱼苗相比,该鱼被确定为健康。因此,20-mg / L CuSO4 治疗阳光鲈鱼卵应该是安全的。

观点

这些结果表明20 mg / L CuSO4 足以控制阳光鲈鱼卵上的真菌。这项研究的结果证明了CuSO的有效性4 在流水线孵化罐中控制腐烂症和增加日照鲈鱼幼虫存活率方面的研究。可以合理假设CuSO4 可能对此类系统中孵化的其他卵有效;例如I科(Ictaluridae)(例如cat鱼),Per(Percidae)(例如大眼鲷),Centr(Centrarchidae)(例如大嘴鲈)和鲑科(Salmonidae)(例如虹鳟和其他鲑科)阳光鲈鱼幼虫可能以CuSO的速率死亡4 用于治疗卵脂溢症;因此,孵化开始时应停止治疗。这项研究的结果证实了CuSO4 可以是控制孵化场操作中阳光鲈鱼败血症的一种经济且有价值的工具。

第一作者(Straus)于今年初作了关于硫酸铜在水产养殖中的用途的介绍。他说:“铜对于孵化场处理鱼卵非常便宜。”例如,用推荐的过氧化氢浓度处理a鱼卵孵化槽为$ 0.89,用福尔马林处理槽为73美分,用硫酸铜处理槽为2美分。 Straus发现,蛋壳可以保护高达100 ppm硫酸铜的channel鱼,大嘴鲈和虹鳟。但是,养殖者需要意识到离开孵化场的水域中的鱼类以及水的化学性质,尤其是碱度,因为硫酸铜在低碱度的水中有剧毒。