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环保计划 是其他虾类疾病的危险因素

Luis Fernando 阿兰古伦 博士 吉恩汉(Dee V.M.)博士 唐凯(Kathy F.T. 唐 )博士

肝胰腺微孢子虫的存在使太平洋白虾易患AHPND,SHPN

 环保计划
环保计划 在AHPND爆发之前就已经影响了虾类养殖业,因此EHP可能倾向于建立AHPND和其他细菌性疾病,例如SHPN。

细胞内肝胰腺微孢子虫 肝小肠肠杆菌 (EHP)已在养殖的黑虎虾( 斑节对虾 )和太平洋白虾( 南美白对虾 )在中国,印度尼西亚,马来西亚,越南,泰国和印度,以及其他东南亚国家/地区。

环保计划 会导致生长迟缓和大小变异性增加,在更晚期阶段,受感染的虾壳软且表现出嗜睡,减少食量和空肠的现象。目前,EHP已通过组织学诊断, 原位 杂交和PCR。

虾显示WFS当前EHP和SHPN; 环保计划 + SHPN = WFS

在2009年至2012年期间,已报道一种新出现的疾病,称为急性肝胰腺坏死病(AHPND),也称为早期死亡率综合症(EMS),在大多数报告了EHP的国家中,造成了养殖虾的重大死亡和生产损失。在某些情况下,还报告了AHPND与EHP共同感染。确定AHPND的病原体是弧菌,包括 副溶血性弧菌, V.campbellii,欧文氏菌 哈维 .

一些亚洲虾类养殖国家,特别是印度和印度尼西亚,仅受到EHP的影响,到目前为止,尚无AHPN​​D病例的报道。这些国家的细菌问题加剧了肝胰腺弧菌病,这种病一直是“跑步死亡率综合症”和“白屎综合症”。受这些条件影响的虾表现出败血症性肝胰腺坏死(SHPN)。

由于EHP在AHPND爆发之前就已经影响了虾类养殖业,因此EHP可能赞成建立AHPND和其他细菌性疾病,例如SHPN。为了确定EHP与AHPND和SHPN的关系-在美国国家粮食与农业研究所(ARZT-5704190-A50-126)项目的支持下-我们评估了EHP与这些疾病的风险因素:和SHPN通过病例对照分析。本文总结了原始出版物[ 水产养殖 471(2017)37-42)]。

研究设置

无特定病原体(SPF) 南美白对虾 使用来自商业设施(佛罗里达州伊斯拉摩拉达的虾改进系统)的产品。实验性感染在美国亚利桑那大学的水产养殖病理实验室(APL)进行。请参考原始出版物或与第一作者联系,以详细了解在APL处繁殖SPF虾中EHP感染的各种实验; AHPND 细菌菌株和培养; AHPND 致病性生物测定和组织病理学; 12小时时间感染过程中的细菌计数和组织病理学;农场水平的肝胰腺微孢子虫病(HPM)与化脓性肝胰腺坏死(SHPN)之间的关系; 环保计划 的组织病理学和原位杂交(ISH); 环保计划 和AHPND PCR检测;以及本研究中使用的统计分析。

结果

关于在AHPND感染之前的EHP感染,通过EHP预感染虾样品和EHP阴性对照组的组织病理学证实了EHP。根据半定量的等级,感染的严重程度在G1和G2之间。感染在内侧和近端区域比在远端区域更为突出。在实验性感染之前,在任何动物中均未观察到AHPND病变。

表1显示了实验VP的结果 AHPND 感染。在两个实验中在阴性对照罐中均未观察到死亡率。经PCR和组织病理学证实,副总裁 AHPND 在该实验中使用的被感染动物引起了AHPND。暴露于高剂量的人群 副溶血弧菌 死亡率很高(分别为83%和64%)。

Erang 阿兰古伦 ,表1

实验 实验小组 治疗 剂量(CFU / mL水) 死虾数量/数量总 死亡率(%)
1 AHPND 低剂量 2.4 X 10(5次方)0/50
1 环保计划 -AHPND 低剂量 2.4 X 10(5次方)3/560
1 积极控制 高剂量 2.4 X 10(6次方)5/683
1 坦克控制 环保计划 阴性对照00/50
1 坦克控制 SPF阴性对照00/50
2 AHPND 低剂量 2.4 X 10(5次方)2/1118
2 环保计划 -AHPND 低剂量 2.4 X 10(5次方)4/944
2 积极控制 高剂量 2.4 X 10(6次方)7/1164
2 坦克控制 环保计划 阴性对照00/50
2 坦克控制 SPF阴性对照00/50
表1.用EHP(EHP-AHPND)预感染的虾与未用VP-AHPND感染的未预感染的虾(AHPND)的比较死亡率。

环保计划 -AHPND 组的未成年幼虾(虾被EHP预先感染VP AHPND )以低剂量进行攻击时,死亡率比AHPND组的死亡率更高(分别在1号和2号实验中分别为60%比0%和44%对18%)(虾被VP感染) AHPND )。

图1显示了AHPND组与EHP-AHPND组之间的生存曲线比较,发现存在显着差异(P< 0.05).

 

图1:AHPND感染的AHPND组与EHP AHPND 组之间的累积生存曲线比较。实验2。

通过组织学检查的垂尾动物具有AHPND的典型病变,包括肝胰腺中部和近端肝胰管小管上皮细胞大量脱落,并向外发展到远端。在某些动物中观察到了末期(由典型的SHPN表征)。

通过PCR分析死动物的AHPND和EHP。在AHPND组和阳性对照罐中,仅发现AHPND阳性结果。在EHP-AHPND组中,虾的AHPND和EHP均为阳性。实验幸存者虾没有任何AHPND组织病理学损害。

在组织病理学和细菌计数实验中(感染时间为12小时),在感染后的前6小时(h.p.i),在AHPND组中未观察到AHPND的组织学损伤。两只动物在12 h.p.i表现出AHPND病变的早期阶段,严重程度为G1。

左:WFS的组织学,粪便– H&E.右:在WFS上进行EHP的原位杂交[White Feces – ISH(EHP)]。从唐等人。 (2016)。
在EHP-AHPND组中,在0 h.p.i时,仅观察到并通过ISH证实了EHP的轻度损害;在头6 h.p.i观察到AHPND和轻度的组织病理学损害。

与ISH相比,并非所有脱落的细胞对EHP均具有阳性反应,这表明脱落存在于EHP感染的细胞和EHP未感染的细胞中。在每小时12点,B细胞不存在,坏死向远端发展,并出现大量脱落。在每小时12点,EHP-AHPND组的虾中有57%表现出AHPND,而AHPND组的虾中有11%表现出AHPND。在阴性对照虾中未发现AHPND的组织学迹象。

在个案对照研究中(农场一级的EHP和SHPN),在2015-2016年期间,分析了100例少年的记录 南美白对虾 具有EHP历史的东南亚养殖场19个养成池塘的虾。我们的数据显示,SHPN病例与EHP感染虾之间有很强的联系。具有EHP的动物中SHPN的频率高于没有EHP的虾。

观点

在SHPN和EHP病例之间发现的紧密联系表明,EHP增加了虾对虾的易感性。 弧菌 细菌–已知的机会病原体,当虾类健康受到损害时会引起疾病。 环保计划 感染会破坏肝胰腺小管的细胞并允许 弧菌 spp。已经存在以定殖脱落的细胞和暴露的基底膜。

使用两种独立的方法,我们的研究表明,EHP感染的太平洋白虾与AHPND和SHPN共同感染。这些共同感染的重大影响最有可能是由微孢子虫和细菌病原体对肝胰腺组织的协同作用所解释的。通过他们的共同行动,VP的共同感染 AHPND 而EHP则极大地增加了对肝胰腺的损害,甚至导致了整个组织的衰竭和发病。

病例对照分析:2015-2016年东南亚凡纳滨对虾幼虾养殖中败血症性肝胰腺坏死(SHPN)病例及与EHP的关系。从Aranguren等。 (2017)。

我们的结果可能有助于解释观察到的全世界虾类养殖国家疾病暴发的模式。例如,东南亚国家(如中国,越南,泰国和马来西亚)在过去十年中爆发了EHP疫情,并在数年后最终也爆发了AHPND。印度尼西亚和印度等其他国家最近也报告了EHP的存在,但尚未爆发AHPND。

但是,在印度尼西亚,一种新兴的疾病,称为白屎综合征(WFS),似乎是由于EHP与其他机会性疾病的共同感染所致。 弧菌 spp。导致SHPN。类似地,在印度,最近已经报告了运行死亡综合症(RMS),受影响的动物虾的肝胰腺严重受损。

制定预防EHP或处理受影响池塘的措施可以大大减少虾类水产养殖的生产损失,因此我们鼓励进行这项研究。

第一作者提供参考。