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检查原生动物Perkinsus sp。在墨西哥太平洋牡蛎养殖中

Cesar M.Escobedo-Bonilla博士 里兹(Lizeth C.Villanueva-Fonseca)

研究确定锡那罗亚州北部的患病率和感染强度

牡蛎
太平洋牡蛎是世界许多地区养殖的重要水产养殖物种。

太平洋牡蛎(景天属), 一种日本本土的软体动物,由于其快速的生长速度和承受广泛盐度变化的能力而成为备受赞赏的水产养殖物种。目前,该物种已在全球20多个国家/地区养殖。在墨西哥,该物种于1973年首次引入加利福尼亚下加利福尼亚州的San Quintin湾。此后,其养殖遍及墨西哥西北部。

牡蛎病原体研究

在墨西哥,自1962年以来就记录了影响该物种的病原体,当时原生动物 柏金枪鱼 在美国牡蛎中被发现(景天)在Tamaulipas的Laguna Madre。在1990年代后期,该病原体在东部的塔巴斯科州和韦拉克鲁斯州报告。墨西哥太平洋沿岸被认为不含这种病原体,但是该地区的死亡记录导致监测该区域养殖牡蛎物种的健康状况。

1998年,加利福尼亚湾沿岸养殖牡蛎的死亡率最高。致病因子未被发现,据认为可能涉及到一系列因素,例如高水温,高放养密度,污染物的存在以及由于繁殖引起的生理压力以及病原体的存在。在2008年, 珀金斯菌。据报道在牡蛎物种的纳亚里特州,索诺拉州和锡那罗亚州 t, C. gigas椰子, 分别。这种原生动物在墨西哥西北部的起源尚不清楚,但可能与引入 维尔纽斯 来自美国东海岸的牡蛎或来自墨西哥湾的牡蛎。

我们研究的目的是确定患病率 珀金斯菌。在培养 C. gigas 在锡那罗亚州北部被称为“ La Pitahaya”的河口中,使用两种检测方法确定年度养殖周期中的感染强度。我们非常感谢弗吉尼亚州海洋科学研究所的Nancy Stokes博士&美国弗吉尼亚州的玛丽大学,为 柏金枪鱼 样品。

研究区域位于锡那罗亚州北部的“ La Pitahaya”河口,坐标为25度18–25度24'N和108度32'–108度45英尺(图1)。使用来自索诺拉(SREORA)孵化场的牡蛎(n = 6000)(大小3-4毫米)。 3月以两种密度放养牡蛎:每个托盘28和42个牡蛎(50 x 50 x 10厘米)。使用长线培养系统,并且培养进行了13个月。每两周监测一次水温和盐度,清洗托盘并记录死亡率。另外,对牡蛎(n = 50)取样以测定其总重量(g),以确定比生长速率。

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图1:的地理位置 Crassostrea gigas 墨西哥北锡那罗亚州河口“ La Pitahaya”的文化遗址。

珀金斯菌。患病率,感染强度

用于检测 珀金斯菌,每月随机收集30只牡蛎,并对其进行处理,以进行巯基乙酸盐液体培养基(TFM)分析。简而言之,解剖来自单个个体的g和/或地幔的组织,并将其放入装有9.5 ml无菌TFM和抗生素/抗真菌药的15 ml Falcon管中。在黑暗中于22至25摄氏度下孵育4至7天。孵育后,收集组织片段,并用载玻片上的无菌刀片切碎。将组织用Lugol-碘溶液染色,盖上盖玻片,在室温下孵育10分钟,并分别在100 X和400 X下通过光学显微镜(Leica DM750,德国)进行检查。

牡蛎
图3:Perkinsus sp。通过硫代乙醇酸酯液体培养基(TFM)分析。 a)有珀金斯病迹象的牡蛎; b)在TFM中培养的披风组织未显示Perkinsus hypnospores(150X); c,d)根据Mackin标度(150 X),在感染水平2上显示出Perkinsus催芽孢的地幔组织。

为了进行PCR检测,按照制造商的说明,使用g和套膜组织进行DNA提取(DNAzol,美国俄亥俄州辛辛那提市分子研究中心,公司)。 PerkITS85(5'-CCG CTT TGT TTG GAT CCC-3')和PerkITS750(5'-ACA TCA GGC CTT CTA ATG ATG-3')引物,可扩增rRNA内部转录间隔子(ITS)的片段(703个碱基对) )来自 珀金苏斯 被使用(OIE,2009)。 DNA的阳性对照 景天 感染 柏金枪鱼 被使用了。将PCR产物解析为1%的琼脂糖凝胶电泳,并用溴化乙锭(1μg/ ml)染色。

我们确定了 珀金苏斯 感染的强度以及感染的强度,这是使用Mackin的相对量表通过催眠孢子计数来计算的。

结果

牡蛎在28只动物/盘的密度下显示出2.52±1.00 g的比生长率,在42只动物/盘的密度下显示出2.54±1.05 g的比生长率。水温是影响生长的最大因素,因为在一年中温度记录最高的月份中,最低的增长率是最高的(29)–32ºC)(6月至10月)或最低温度(≤17°C)的月份(1月至4月)(图2)。这些数据表明,温度高于27ºC或低于22ºC会对生长产生负面影响。七月和十月录得负增长率。在这里,牡蛎经历与性成熟和生殖有关的生理变化,这会由于性腺减少而引起体重减轻。

养殖结束时,牡蛎的平均重量分别为28和42个动物/托盘,平均重量为204.07±18.97 g和207.09±15.29 g。密度为28和42个牡蛎/盘时,养殖结束时的存活率分别为95.9%和94.3%。死亡率主要记录在高温月份(6月至10月)中。

检测 珀金苏斯 TFM感染首先在放养后两个月发生。在最温暖的月份(8月),珀金森斯的患病率在16.6%和23.3%之间变化。–10月),而在最冷的月份(12月至2月)则分别减少了20%至10%。患病率 珀金苏斯 在文化的最后两个月(2012年3月至2012年4月)中最高(分别为26.6%和40%)。根据Mackin量表,TFM的感染强度始终在1-2级之间(图3)。

通过PCR检测 珀金苏斯 发生到放养后五个月。通过PCR发现的患病率始终低于通过TFM获得的患病率。通过PCR,发现流行率最高的时间是10月至12月(分别为10%,6.6%和13.3%),在2012年1月至2012年2月(分别为6.6%和0%)和培养周期结束时(3月至4月)减少(2012年),患病率最高(分别为16.6%和26.6%)(图4)。

图4:通过TFM或PCR诊断,在培养的13个月中,珀金索斯感染的月流行率。
图4:每月的患病率 珀金苏斯 通过TFM或PCR诊断在培养的13个月内感染。

观点

存在的 珀金苏斯 最近在锡那罗亚州的四个沿海地区(Cospita,La Reforma,Topolobampo和La Bocanita)报道了牡蛎的野生种群 椰子C. corteziensis。我们的研究增强了 珀金斯菌。在培养 Crassostrea gigas 在锡那罗亚州北部的“ La Pitahaya”河口。在我们的研究中, 珀金苏斯 取决于温度和培养年龄,培养周期的变化范围为40%至6.6%。感染强度为2级,可能是由于感染的敏感性较低 C. gigas珀金苏斯 感染。