有关世界上发展最快的产业之一水产养殖发展的新闻报道和技术文章。

改善营养可增强对虾的免疫能力和抗病能力

彼得·库托(Peter Coutteau) 塞勒曼斯 L.詹 索尼尔 勒梅尔

在大溪地IFREMER设施进行的实验

抗病性
目标:健康收获 斑节对虾。

虾类生产中的大多数疾病问题都很复杂,人们对此仍然知之甚少。可持续管理策略和法规限制了可用于治疗病原体的药物数量。与农业相反,水产养殖中的药物经济学并不吸引制药业投资开发新型的,可接受的治疗剂。疫苗在甲壳类动物中可能无效,因为它们缺乏类似于脊椎动物的特异性免疫系统。因此,虾类水产养殖者必须考虑种质,饲养程序和健康营养作为控制疾病的主要手段。

通过饲料改善健康

当前的营养研究工作致力于确定影响虾健康和免疫的关键营养素的需求,例如维生素C和E,磷脂,必需脂肪酸,微量矿物质和类胡萝卜素。

加强非特异性防御​​机制和保护虾免受疾病侵害的最有前途的发展领域之一是免疫刺激剂的管理。已经鉴定出各种化合物,其中大多数来源于微生物的细胞包膜,例如多糖,脂蛋白和脂多糖。初步结果表明,各种市售免疫刺激剂改善鱼虾的压力和/或疾病抵抗力的功效在很大程度上取决于产品的类型,以及对支持免疫系统建立必不可少的辅助营养素的供应。因此,旨在改善抗病性的特种预混料的设计基于对适当免疫刺激剂的选择以及关键营养素的均衡供应,以支持增强免疫系统。

实验条件,设计

评估疾病状况的方法学困难以及甲壳类动物免疫学知识有限,阻碍了对虾疾病控制研究的进展。在我们的研究中,免疫刺激性专业预混料对猪抗病性的影响 南美白对虾 使用血淋巴参数(离体)以及挑战测试(体内)评估了血红蛋白。

实验在塔希提岛的IFREMER中心Océanologiquedu Pacifique进行。少年虾(南美白对虾,从商业池塘中收集到5.1克±0.5克)并转移到实验室,在实验室中将它们饲养在500升罐中(每罐70只虾),并喂食当地的商业饲料直至试验开始。

对于每种处理,放养两组动物: 

  1. 用于分析血淋巴参数的动物:每200升槽中有12只虾(五槽=每次处理60只虾)。
  2. 用于挑战测试的动物:每500升槽中有50只虾(三槽=每次处理中有150只虾)。

实验在26至28摄氏度和35 ppt盐度下进行。在试验过程中,通过在500升水箱中每次处理标记45只虾来跟踪个体生长。在提取血淋巴或进行攻击试验之前的21天内,将虾喂给实验性饲料。

抗病性
提取血淋巴样品,以确定循环血细胞的总数及其吞噬活性。摄影:K。Vande Braak。

饲料准备,性能

实验饲料是通过蒸煮挤压生产的。高性能配方用作对照饲料(40%的粗蛋白/ 8%的粗脂肪),其中1%的填充剂(纤维素)被免疫刺激性预混料替代(INVE Aquastim-S,表1)。

Coutteau,实验饮食的配方,表1

原材料控制Aquastim-S
标准鱼粉(CP的72%)33.933.9
虾头饭5.05.0
脱脂豆粕11.011.0
小麦面筋2.02.0
面粉16.216.2
小麦中22.622.6
鱼油1.31.3
虾预混料* 5.05.0
纤维素(填充剂)3.02.0
INVE Aquastim-S 10-00 ** 1.0
100.0100.0
*营养浓缩物,提供维生素,矿物质,微量元素,磷脂,必需氨基酸,胆固醇,引诱剂。
**特种浓缩物,提供精选的免疫刺激剂和营养素的混合物。


表1.实验饮食的配方(饮食的百分比)。

 

在整个试验过程中,虾的活动都非常出色,在三周的喂养期间没有观察到死亡率。在三周内,用带标签的虾测量的个体体重平均增加3.6至3.9克(每周约1.2-1.3克)。与对照组相比,添加Aquastim-S补充饲料的虾的平均体重增加了9%。同样,Sung等。 (1994年)显示了由于免疫刺激对幼虾后虾的生长(斑节对虾)。

血淋巴参数

蜕皮阶段是在双目显微镜下使用Drach和Tcherni-govtzeff(1967)的方法确定的。使用1 ml无菌注射器在最后的头胸部段和第一个腹部段之间抽取血淋巴,并且仅从处于融合期(C或D期)的动物中抽取0)以避免蜕皮阶段的干扰。

血细胞总数 

使用Le Moullac等人的方法在光学显微镜下在微量滴定板中计数总数,而没有区分三种类型的血细胞。 (1997)。

血细胞吞噬活性 

吞噬作用是虾免疫系统的重要组成部分,负责消除虾血淋巴中的异物。它在所谓的“呼吸爆发”过程中产生自由基的释放,导致强烈的杀菌作用。硝基蓝四氮唑(NBT)的颜色变化用于通过定量阴离子超氧O来评估吞噬活性2–,这是呼吸爆发期间释放的第一批产品。 NBT(黄色)氧化成甲maz(蓝色)是血细胞氧化活性的量度。照Secombes(1990)的方法测量血细胞的NBT活性(基本NBT活性),或在体外通过暴露于免疫刺激剂对血细胞进行免疫刺激(NBT活性)。

饲料对血淋巴参数的影响 

血淋巴中循环的血细胞总数显示个体虾之间的高度变异性(表2)。然而,与对照组相比,Aquastim-S治疗的总血细胞计数明显较低。免疫刺激可能会降低血淋巴中循环血细胞的浓度,这是由于血细胞在免疫刺激的组织和器官中的浸润。

Coutteau,总血细胞计数的演变,表2

 饲料号码虾平均标准误差
第0天(初始)商业饲料2436,2502352
Day 21控制3244,506一2170
Day 21Aquastim-S2632,969羽2605
表2.在21天中,适应商业饲料的虾和采用虾饲料的实验饲料之间的总血细胞计数(每mm3血淋巴)的演变。

 

抗病性
图1:在21天内适应商业化饲料的虾和以虾喂养的实验性饲料之间的基础(NBTb)和刺激性(NBTs)吞噬活性的演变。数据代表初始和最终虾分别为11和24个个体的平均误差和标准误差。不同的上标指示明显的治疗差异(学生t检验,P<0.05).

与饲喂商业饲料的虾的初始值相比,两种方法在试验期间均以基础和刺激的NBT活性为基准测量了血红细胞的杀微生物活性。在Aquastim-S组中,吞噬活性的增强最为明显,与初始值相比,基础NBT增加了两倍,受刺激的NBT增加了2.4倍(与对照饲料相比分别增加了33%和84%) )。由于饲料中添加了Aquastim-S,每单位基础NBT刺激NBT的比率(从1.1增加到1.5),这是衡量血细胞杀微生物能力的比率。

挑战测试

实验感染是使用高毒力的 肺炎弧菌 (AM101)。在2小时内将虾浸入10升海水中,该海水每毫升AM101含105 CFU,该剂量已预先测试以针对攻击中的适当死亡率。对照组接受与挑战虾相同的处理,但在浸泡过程中未暴露于细菌。实验性感染后,将虾用海水冲洗,并转移到每100升预过滤的海水(1 µm)中盛有25只虾的水箱中。连续给水充气,并将温度保持在24至26摄氏度。在连续五天中每天确定三次死亡率。在随访期间继续进食。感染组每处理一次运行四个水箱(约100只虾),而未感染对照组每处理一次运行两个水箱(约50只虾)。

灵敏度

抗病性
图2:喂食两种实验饲料的虾在实验感染期间的累积死亡率(%)。数据代表两个(未感染对照)或四个(挑战虾)鱼缸的平均和标准偏差,每个鱼缸最初装有25只虾。不同的上标表示显着差异(学生t检验,P<0.05).

通过在感染后五天观察到的总死亡率和累积死亡率指数来表示对攻击试验的敏感性,累积死亡率指数是根据随访期间观察到的累积死亡率之和计算得出的。累积死亡率指数考虑了总死亡率以及死亡率随时间的分布。

饲料对挑战死亡率的影响

在为期五天的随访期内,未感染组的死亡率有限(两组均为5%,图1)。五天后,Aquastim-S和对照组的细菌感染导致总死亡率分别为16%和34%(由于添加了饲料,死亡率降低了53%,图2)。同样,与Aquastim-S组相比,对照组的累积死亡率指数显着更高(分别为377±77和190±78)。

结论

我们的结果表明,营养是提高对虾健康状况的有效工具。将所选免疫刺激剂和营养素的混合物添加到高质量饲料中 南美白对虾 喂养三周后可增强免疫能力和对疾病的抵抗力,具体表现为:

  • 血淋巴中循环中的血细胞总数减少(与对照组相比减少了26%)
  • 血细胞吞噬活性的增强(与对照组相比,基础NBT和受刺激的NBT活性分别增加了33%和84%)
  • 挑战性试验的存活率提高了(实验组感染后,死亡率比对照组低53%) 肺炎弧菌)。

注意:引用的参考文献可从第一作者那里获得。

(编辑’注意:本文最初发表于2001年10月的 全球水产养殖倡导者


GAA的GOAL 2020会议可能已经结束...

…但是内容仍然存在。对于GAA个人和企业会员,可以在GOAL 2020会议平台和GAA成员工具包中按需访问全部10个计划会议(总共15个小时的内容),以及GOAL 2020演示文稿的PDF。

还不是GAA成员?加入我们。