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益生菌能力 Pseudovibiro Denitifificans. 分离海绵

Cristóbaldomínguez-博尔堡 valeska ardiles. 玛丽莎贝梅奥 ChalénBolívar-alvarado CeciliaTomalá. Stanislaus sonnenholzner,博士。 珍妮A.Rodríguez,博士。

结果表明潜力控制新兴 颤音 SPP。在虾水产养殖中

Pseudovibio.
这项研究的结果表明了这些的潜力 Pseudovibiro Denitifificans. 孤立的海绵 aplysina gerardogreeni 控制新兴 颤音 SPP。在虾水产养殖中。

一些 颤音 SPP。已与虾死亡率有关,并在生产养殖虾的国家造成大规模的经济损失。最严重的疾病 颤音 是急性肝癌坏死疾病(AHPND),并且已经确定了几种vibrio物种涉及,所有这些通常携带含有pira和piRb毒素基因的70kbp质粒(pva1)。

抗生素和消毒剂的非常有限的效率来控制这些 颤音 SPP。导致使用益生菌作为流行病学控制工具的兴趣日益感兴趣。益生菌的使用是当前虾水产养殖中的常见做法。即,有两种主要的益生菌作用方式 - 竞争性排斥和免疫调节。益生菌占据并殖民消化道,降低了殖民单的殖民的能力。

众所周知,益生菌可以在虾中改变肠道微生物群。通过抗菌物质的分泌,益生菌对抗病原体,防止它们对肠上皮的粘附,竞争必要的营养,产生抗毒性作用。有许多商业益生菌,主要是基于细菌菌株的 乳酸杆菌芽孢杆菌.

无论它们的虾效果和可能的益处如何,许多这些细菌都不是典型的海洋环境,在太平洋白虾的虾养殖系统中提出了培养问题( Penaeus vannamei.),他们必须竞争的地方 颤音 SPP。典型的海洋环境。

在寻找益生菌细菌,典型的海洋环境和能够控制 颤音 SPP。虾,探索典型的海洋环境的其他细菌属。来自海洋生物的共生细菌可能是理想的候选者,因为它们适应海洋病症,可以在不利的环境中茁壮成长。众所周知,海绵海绵港口非常多样化的微生物社区,但只有一小组这些共生细菌可以培养。最适合培养的细菌组在属中 Pseudovibio.而且它的物种已从几个海洋无脊椎动物,扁平蠕虫,海绵和外形中分离出来。

Pseudovibiro菌株具有产生次级代谢物的基因组潜力和向主体供应辅因子。在具有不同生物活性的几种分子中,具有最活跃的抗微生物活性的分子是对芝麻酚的生物酸(TDA),生物碱和聚酮化合物。

最近,据报道,低浓度的TDA(0.5μg/ ml)表现出针对两种致病珊瑚弧的活性。由于新化合物的生产和其代谢物的多功能性,据报道了Pseudoviro属的生物技术潜力。尽管有这些属性,迄今为止没有关于使用的报告 Pseudovibio. SPP。在虾水产养殖中控制出现的致病性 颤音 spp.

本文 - 改编和总结 水产养殖(厄瓜多尔)问题130,2019年8月 - 报告研究几个分离株虾类培养物中的益生菌能力 P. Denitrififulans. 与海绵孤立 aplysina gerardogreeni 收集在El Pelado海洋保护区(remape),圣埃莱娜,厄瓜多尔。

获得了43个分离株的假纤维,并进行体外竞争排除测定 颤音 SPP。进行了。大多数生物活性菌株通过实验室和虾池的体内测试验证。本文呈现了几个益生菌品质的证据 P. Denitrififulans. 孤立,突出显示他们作为控制新兴的有用工具的潜力 颤音 SPP。在虾水产养殖中。

研究设置

共有九个样本 A. Gerardogreeni. 来自Santa Elena,厄瓜多尔的沿海水域的不同深度的四个岩石栖息地潜水,在四个岩石栖息地潜水收集。海绵样品被运输到国家海洋研究中心(Centro Nacional de Investigaciones Marinas,Cenaim)。

在实验室中,用手术刀和镊子从海绵样品中除去宏观胚胎和诱捕。将5克从体内的不同部分取出的组织浸渍并在45ml无菌天然海水(NSW)中稀释。随后,将均化样品连续稀释至10-5 在新南威尔士州。一百(100)μl稀释液10-2 to 10-5 在含有海洋琼脂2216(MA)BD Difcotm的培养皿中的三份播种。将板在27摄氏度下孵育两天。随后,选择不同的Morothepys并通过含有Ma的培养皿上的连续条纹纯化。基于它们的形态学和生化特征,最初选择假纤维菌株。

随后,基于16 rRNA基因的核苷酸序列测定表现出生物活性的分离物的分类。对于Pseudovib的纯培养物,在Luria-Bertani培养基中用NSW和20%甘油进行等分试样,并在负-80度-c下储存以进行后续测试。

有关伪组氧菌株的生化表征的详细信息;体外评估抗 - 颤音 生物活性;痛苦接种的竞争排除试验; 16S RRNA基因测序扩增;安全评估 P. Denitrififulans. 在生存中 P.Vannamei. postlarvae;效果 P. Denitrififulans. P.Vannamei. Postlarvae暴露于vibrio病原体;效果 P. Denitrififulans. 论后达拉夫和少年的生存 P.Vannamei. 通过挑战测试 V.Campbelli.V. Parahaemolyticus.;竞争排斥的影响 P. Denitrififulans. 反对发光 V.哈韦蒂 在自然感染 P.Vannamei.postlarvae; Pseudovirio在文化池塘中的应用效果 P.Vannamei.;细菌生物量生产;池生物测定;和统计分析,请参阅原始出版物。 

结果和讨论

虾养殖的商业益生菌主要属于属于永久性 乳酸杆菌 芽孢杆菌。虽然一些商业用过的物种是海洋,但大多数商业益生菌的细菌是陆地来源,因为它们最初被配制为其他陆地动物。虽然这些细菌配方被证明是对原始靶生物有效的,但是当环境条件截然不同时,它们的效率可能会受到损害,如在海洋虾作物的情况下。 Penaeid虾均受高盐度和温度范围的影响,这有利于生长 颤音 SPP。

最佳的盐度和温度培养 P.Vannamei. 是20至35升,22至32度-c。使用Metagenomics,张等人。 (2016)显示盐度在虾中改变微生物群,发现盐度越高,弧菌的主导越多是损害的 乳酸杆菌,而Vezzulli等。 (2013),报告称,低于37摄氏度的温度对其产生负面影响 乳酸杆菌.

海洋生物消泡(海洋生物材料样本 - 例如植物,动物和其他生物 - 用于测试可能具有商业应用的化合物,如新的药物和杀虫剂)是一种有前途的替代方案,可以将功能作为有效益生菌的母细菌孤立可以培养的海洋生物。海洋无脊椎动物,特别是海绵,含有巨大的细菌多样性。在可以培养的海洋细菌中,Pseudovire属的脱颖而出,近几十年来,由于其多功能性,以产生针对革兰氏阴性和革兰氏阳性细菌的生物活性分子,这是研究的主题。

在这项研究中,我们分开了几个分离株 P. Denitrififulans. 由于其强烈的抗颤动生物活性,它表现出肥料的益生菌品质。我们的实验中展示了这些品质,在实验室和文化池塘中挑战测试。

Dominguez,Vibrios,表1

治疗方法袜密度(每平方米)平均重量(g)存活(%)产量(kg / ha)FCR.
Ps-17810.2±2.0 a79.2±5.3 a899.6±59.5 a0.99±0.16 a
Ps-18810.8±3.4 a66.3±6.8 b753.4±77.2 b1.14±0.28 a
控制89.4±2.4 a63.0±6.7 b715.9±76.4 b1.35±0.32 a
表1.在108天的生物测定期间Pseudovib菌株对vannamei虾的效果(生产循环持续时间)。结果呈现为平均±SD(n = 4)。不同的小写字母表示显着差异(p <0.05).

 

我们发现生物活跃 V. Parahaemolyticus,V.Campbellii,V.Vulnificus V.哈韦蒂 并对高毒性的致病菌菌株 V. Parahaemolyticus. Ba94c2阳性pira / pirb,毒素与虾类文化中的ahpnd病理相关。据我们所知,这是第一个分析伪象的反颤动潜力 颤音 SPP。在虾。在许多研究中提到了伪组纤维属的抗菌活性,抗革兰阳性和革兰氏阴性细菌,例如 大肠杆菌,芽孢杆菌,枯草芽孢杆菌, Kluyveromyces Marxianus,Salmonella肠道 血清苏尿, 金黄色葡萄球菌 耐甲氧西米兰(MRSA)和 Clostridium艰难术.

Pseudovibio.
图。1:对致病性振动的分离的假膜生物活性。一种) Pseudovibio. SPP。反对 V.哈韦蒂 (E22)。 b) Pseudovibio. SPP。反对 vibrio campbellii. (LM-2013)。 C) Pseudovibio. SPP。,反对 V.Vulnificus. (S2)和氧赤素椎间盘。 d) Pseudovibio. SPP。反对 V. Parahaemolyticus. (Ba94C2)和氧赤素盘。

最近,据报道了珊瑚中发现的两种弧菌病原体的活动, 颤音 Coralliilyticus. vibrio owensii.。伪组义菌株的抗菌活性与其代谢物,硫酸和荧光酸(TDA)有关。 TDA可以杀死或抑制Vibrio SPP。鱼幼虫的病原体。此外,盐度有利于假纤维的生长,因为它是典型的海洋环境的细菌,我们的假膜分离物在25至31摄氏度之间的最佳增长。这些条件有利于他们竞争的能力 颤音 spp.

评估益生菌特征的一个非常重要的步骤是排除细菌候选者的安全性。我们的结果证实了三个安全 Pseudovibio. 在Zoea-1虾幼虫中评价的分离物。微生物分析证实了 Pseudovibio. 与Zoea-1有关,不会引起不利影响。一些 Pseudovibio. SPP。已被报告为Symbionts(共生中的生物,两种海洋底部底栖无脊椎动物的两种不同的生物体之间的任何类型的密切和长期生物相互作用),包括虾。此外,Pseudovibio能够在不利的环境中存活,营养物质可以波动,例如浅海水,并且可以在超缺乏营养(低营养水平)海水中增殖。

该属的这种代谢多功能性地利用其与无脊椎动物宿主的关联,是有益的或至少中立,因为它们中的大多数通常与健康动物有关。在安全测试之后,下一步是确定有效性 P. Denitrififulans. 反对 颤音 SPP。使用 体内 tests.

验证有效性 P. Denitrififulans. 作为益生菌,使用两个高度毒性的vibrios进行两次挑战测试, V.Campbellii.V. Parahaemolyticus.,导致挑战性幼虫和青少年的存活率增加。此外,测试是在PL3(3天后的Postlarvae)阶段进行的,其已经自然感染了 V.哈韦蒂,强烈指示了能力 P. Denitrififulans. 竞争和取代 颤音 SPP。存在于虾后培养物和改善PL生存期。

Pseudovibio.
图2:a)三分之二的假纤维含量对生存(暴露后72小时)的影响 P.Vannamei. Postlarvae挑战了 V.Campbellii. 最初用Pseudovibrio治疗五天。 b)假纤维对生存(暴露后72小时)的影响 P.Vannamei. 少年,挑战 V. Parahaemolyticus. 最初用Pseudovibiro治疗10天。错误栏代表S.D.平均值(n = 4)。星号(*)表示与对照有显着不同(P<0.05, Dunnett’s).

这一发现非常相关,考虑到弧菌属的细菌非常适应海洋生物的培养环境。与对照组相比,用PS11,PS17和PS18处理的虾幼虫的存活率没有显着差异。对照组的虾后角度观察到的高死亡率可能与高负荷发光有关 V.哈韦蒂 present.

虾的发光物种与虾养殖的严重死亡有关,主要是虾农场的托儿所。池塘测试证实了应用的有益效果 P. Denitrififulans.,展示其有效性,以提高产量,生存,平均虾收获重量和产量。记录了最佳的生产产量 P. Denitrififulans. 与隔离的PS18相比,分离PS17。这个结果表明了 P. Denitrififulans. 检测的分离物可能具有不同的效果,因此,应在外推的有益效果时谨慎行事 P. Denitrififulans. strains.

Pseudovibio.
图3:P. Denitrifutificans菌株在虾中的菌株和移位虾中的总血管和发光弧菌的疗效。 P. Denitrififulans. 应用。错误栏代表S.D.平均值(n = 3)。星号(*)表示与对照有显着不同(P<0.05, Dunnett’s).

从不同分离株获得的所得生物活性的可变性表明需要使用几个分离株进行类似的研究。在我们的研究中,我们使用了在不同地区收集的九个海绵样品来增加获得大型遗传细菌的可能性。在其他细菌中发现了类似的结果。特别是,菌株(ili) V. Algynoliticus 用作虾的益生菌,而其他物种的其他菌株已被报告为致病性。同样,Sonnenschein等人。 (2018),报告不同菌株的毒性 rosobacter 反对 microalgae.

透视

海洋生物消泡是一个有前途的替代方案,可孤立可用作培养的海洋生物的有效益生菌的海洋细菌。识别 Pseudovibio. SPP。这可能对致病性具有高度生物活性 颤音 SPP。虾,几个不同的海绵的不同图型样本 A. Gerardogreeni. 被收集。从这些中获得43个分离株,包括三个分离株 - 编码为PS11,PS17和PS18 - 显示出最高的生物活性 颤音 SPP。这是虾的高致病性。

抗颤动的生物活性证明 体外 通过在挑战试验中观察到的有益效果,天然感染的幼虫和虾培养池中观察到测试。我们的研究结果表明,哪个假纤维可用作生物控制 颤音 SPP。在虾文化中。需要更多的研究来评估商业规模的实际浓度。

从原始出版物提供的参考文献。


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