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受IHHNV感染的黑虎虾的生长性能降低

梅洛尼·J·塞拉斯博士 杰夫·考利博士 迪恩·马森 民饶 M.L.孟席斯 格雷格·科曼,博士 布莱恩·墨菲

模拟的商业增长增强了基于免费或低水平IHHNV亲鱼过滤,SPF种群的使用以及IHHNV耐药性/耐受性选择的选择价值

感染了IHHNV
由于IHHNV会显着降低养殖黑虎虾(Penaeus monodon)池塘的性能,并且持续的急性感染会导致严重的贝壳畸形,因此选择单个亲鱼和/或成群大小的幼体很重要足以确保仅播种免费或低水平的IHHNNV种子。

传染性造血和皮下坏死病毒(IHHNV)于1983年在美洲首次被发现是太平洋蓝虾大量死亡的原因(猪对虾)培养。不久之后,它也被发现会引起外壳畸形和生长迟缓,称为“矮畸形综合征”在太平洋白虾(凡纳滨对虾)培养。

在澳大利亚和印度洋-太平洋其他地区,通常在黑虎虾中高检测到IHHNV(斑节对虾)野生和栽培。尽管IHHNV感染被认为是相对良性的,并且对该物种的水产养殖意义不大,但是在家养的第三代种群中,急性感染被认为是造成严重贝壳畸形的原因。 斑节对虾 1990年代初期在印度尼西亚。

禽流感病毒的基于PCR的检测由于其三个已知谱系(I,II和III)的菌株之间的基因组序列变异以及已整合到染色体DNA中的非感染性IHHNV基因组形式而变得复杂。一些中的 斑节对虾 在自然范围内分布广泛的人群中。

为避免交叉检测整合型IHHNV基因组的形式,已设计了常规和实时PCR测试,以排除其扩增或特异性检测IHHNV整合型内源性病毒成分,以排除IHHNV谱系感染。 。 禽流感病毒的定量实时PCR(q)测试还提供了一种方法,可以准确地定量IHHNV DNA的量,以作为相对感染负荷的量度。

本文总结了一项研究的结果(//doi.org/10.1016/j.aquaculture.2018.09.032),这是两个同类产品的增长试验 斑节对虾 它们的IHHNV流行率和因IHHNV感染而导致的负担在它们所源自的雌性亲鱼中也大不相同。在模拟的商业条件下,在四个0.16公顷的研究池塘中养殖虾。在四个池塘中每个池塘的生长过程中,使用实时定量PCR来追踪48只对虾的IHHNV的装载和流行情况。这些数据确定了高水平IHHNV感染的早期发作与大幅降低的生长,存活和农作物产量之间的明确关联。

这项研究得到了渔业研究与发展公司(FRDC),澳大利亚虾生产者协会(APFA),科学和工业捐赠基金(SIEF)和CSIRO的财政支持,该报告的最终报告中对此进行了详细说明。 FRDC项目(2015-240 APFA IPA)ISBN 978–0–646-98,999-0。我们感谢以不同方式支持该项目的许多人,以及Ridley Aqua Feed对虾饲料成本的贡献。

增长测试设置

玩家们 斑节对虾 在捕获后的48小时内,在北昆士兰州Bramston海滩附近的沿海水域捕获的鱼被空运至Bribie Island研究中心。收到后,对每只虾进行性别鉴定,称重,用眼标记,并保留一块胸足组织用于PCR分析。在2 x 10,000升的圆形成熟罐中,每个播种都有32只雌性和32只雄性。储罐放在一个带减光盖的暗室中,有一个3毫米的沙床,并装有加热的海水流和足够的通风以保持最佳的溶解氧水平。给饲养员喂食各种天然食物,这些食物通常是当地商业孵化场用来提高生育能力的食物。在视觉消融时和产卵时,从每位雌性身上采集另外的腹足组织样本。

使用标准的孵化程序,将雌性产生的卵在水箱中饲养到幼体后20期(PL20)。将来自一组三头雌性或一组四头雌性的PL20组放到两个重复的池塘中,这些池塘覆盖有塑料并覆盖有鸟网(深40 m×40 m×2 m; 0.16公顷)并使用当地标准的商业惯例进行募集。在生长过程中,定期从四个池塘中的每个池塘中取样144只虾,以记录体重和性别,并保留腹足组织和/或淋巴器官(LO),以供日后分析PCR。用网捕捞虾,最后在150至170天的养殖时间(DOC)内排干池塘,以确定最终池塘的产量和虾的成活率。

感染了IHHNV
照片1.为研究池塘而生产的正在发育的虾幼体的视图。

请参阅卖家等。 (2019)(//doi.org/10.1016/j.aquaculture.2018.09.032)有关亲鱼成熟和产卵方法,幼体饲养,PL计数和池塘储存方法,虾类养殖和取样的更多详细信息。方法,以及TNA提取,cDNA合成和qPCR测试的实时TaqMan,以及统计数据分析。

池塘的性能和生存差异

重量144 斑节对虾 从4个0.16公顷的研究池塘中随机收集每个池塘,并在生长过程中定期进行追踪。从养殖120天(DOC)开始,在4个池塘中的2个(即池塘1和4;图1)中,种群中虾的重量显着降低。从此时间点开始,从这两个池塘收集的虾的总体外观与从池塘2和3收集的虾相比也明显减少。

禽流感病毒
图1.(A)IHHNV /μgTNA的平均log10 DNA拷贝,通过实时qPCR测定,使用从四个池塘中每个池塘采样的144个虾中48个虾中的48个虾的足足组织进行实时定量PCR除了在140 DOC中从30个虾类淋巴器官中评估淋巴器官组织的时间外。 (B)在每个时间点从每个池塘检查的48只虾中通过qPCR实时检测到IHHNV的患病率(%),在140 DOC中仅评估了30只虾的患病率。 (C)在整个生长过程中逐步取样的144个虾/池塘的平均虾重±SE(克),只有140 DOC时才称重,只有30个虾/池塘称重。统计显着性水平(* P<.05; ** P <在每个采样时间点使用合并后的池塘1和4以及合并的低IHHNV池塘2和3的虾的对数转换后的平均重量来确定(0.001)。显示了池塘,池塘1(圆形),池塘4(钻石),池塘2(三角形)和池塘3(正方形)的代码。

从155 DOC开始,在两周的时间内逐步收获虾。为了量化商业规模上的差异,在每个0.16公顷的研究池塘中确定最终收获量,并外推(x 6.25)到典型的1公顷商业池塘中。使用这些数据,池塘2和3(分别为12.3和14.2吨)的产量比池塘1和4(分别为9.0和10.1吨)的产量高22%至58%(表1)。 )。根据确定的收获虾的平均重量,池塘2和池塘3的估计存活率(分别为95.9%和99.8%)也比池塘1和池塘4高13%至25%。 (分别为79.9%和84.5%)。由于池塘2和3养殖的虾群的生长速度更快和存活,与之相比,池塘1和4养殖的虾集体消耗的饲料总量增加了36%。

Sellars,IHHNV,表1

池号 禽流感病毒集团餐饮
消耗(公斤)
重量
收获(公斤)
饲料转化率(FCR)性能
(MT /公顷*)
存活率(%)
2禽流感病毒低3,2452,2731.4314.295.9
3禽流感病毒低3,3371,9961.7012.399.8
1高IHHNV2,4341,6131.5110.184.5
4高IHHNV2,3881,4361.669.079.9
表1.研究期间的斑节对虾池塘生产指标。
*从0.16公顷的池塘中推断出来(即总重量/ 0.16)

使用推算的数量,池塘2和3集体生产的虾比池塘1和4多出7.44吨(平均= 3.72吨/公顷),因为这些虾的平均收获重量导致35到4批发价为38件/千克。在澳大利亚,大约每公顷8澳元,这额外的3.72吨/公顷的产量将使作物的总价值(不考虑额外的饲喂,烹饪和附属费用)提高到每1公顷池塘67,000澳元。

禽流感病毒感染负担的差异

TaqMan实时定量PCR检测确定不存在与g相关的病毒[GAV;在所有四个池塘的亲鱼中繁殖黄and病毒基因型2(YHV2)或黄发病毒基因型7(YHV7)。因此,进行了类似的测试来确定IHHNV感染是否可能是池塘1和4养殖的虾群生长性能下降的原因。

通过TaqMan实时定量(q)PCR分析归一化的TNA量,以直接比较IHHNV DNA载量(作为衡量 实际上所有样本中的感染负担/严重程度)。在收到昆士兰北部亲虾时采集的胸足动物组织的QPCR数据表明,每组中有五个雌性中IHHNV的极低负荷,而每组中的一只雌性中的IHHNV负荷则显着更高。池塘1和4或池塘2和3。最大负载(6.71 x 105在池塘1和4的后代中,有3只雌性中有1只检测到IHHNV DNA拷贝/μgTNA。

在亲鱼成熟,眼柄消融并产卵的约6周期间,IHHNV负载通常会增加。然而,在池塘1和池塘4的后代中,三只雌性的负荷增加到最高水平,最高的雌性比导致池塘1和4的四个雌性中的最高高100倍。池塘2和3。对鸡蛋组的测试确定,IHHNV负荷最高,>从到达雌鸟和产卵时均标出IHHNV最高的雌鸟中收集的卵中的卵比其他雌卵高100倍。

实时定量PCR还用于检测和定量从四个池塘(分别为51、86、120和155 DOC)收获的142-144只虾的48只虾的足足中的IHHNV负荷,以及从每个池塘以140 DOC采样的30只虾(图1)。在目前在池塘1和4中测试的虾中,从86 DOC中检测到IHHNV的流行率为100%。相反,在同时进行池塘2和池塘3分析的虾中,IHHNV的流行率在初始采样点较低,在采样时间(140-155 DOC)时才达到100%,非常先进,在育肥期。在初始采样时间点(51 DOC),池塘1和4的平均IHHNV负荷比池塘2和3的高100倍,而所有四个池塘的平均IHHNV负荷都高1000倍随后的采样时间点(图1)。

结论与后果

通常,已发现IHHNV感染在黑虎虾水产养殖生产中相对温和(斑节对虾)。尽管有此一般前提,但此处描述的结果表明,该物种中的IHHNV感染应比以前认为的更为重视。在很高的持续感染负荷下使虾超负荷的情况下,发现IHHNV能够严重危害虾的生长,总体健康,生存和池塘作物的产量。由于一个1公顷的商业池塘的产量损失总额估计为67,000澳元,因此值得考虑采取预防此类感染发生的措施。

关于哪些干预措施可能提供最有效的方法来限制高负担感染的发生,据指出,在从野外捕获时使用的具有最高IHHNV负担的七名生殖女性中,也有一位烧蚀和产卵时最大的负荷。

此外,该雌性产卵的IHHNV负荷为(2.3 x 105 IHHNNV DNA拷贝/μgTNA)大大高于其他六种雌性(30至1030 禽流感病毒V DNA拷贝/μgTNA),无论IHHNV负荷也适度增加至在收到和产卵之间的六个星期内,这些雌性的体重很大。因此,如果IHHNV在捕获用于孵化场的野生亲鱼中高度流行,并且具有量化qPCR感染严重程度的能力,则应将此类检测方法用作鉴定和杀死它们的手段。高负荷的雌性,要对其进行调节和产卵。在这种情况下,还应考虑对蛋组进行QPCR过滤以识别并去除高IHHNV的人,以确保仅生长出低IHHNV或低IHHNV种子。

RNA干扰(RNAi)策略有可能减少先前存在的病毒感染的负担,从而使感染有可能垂直传播给子代。但是,这项技术尚未成熟到可以提供短期解决方案的程度,除了可能有助于消除来自家养繁殖场的低负担感染之外, 斑节对虾。这种特定的无病原体(SPF)繁殖系 斑节对虾 将提供解决方案,同时还选择了更好的IHHNV电阻/公差线,从而提供了更理想的解决方案。

但是,在诸如澳大利亚这样的检疫法规严格禁止进口用于水产养殖目的的活虾的国家中,产生和维持这种繁殖系的努力未能打破对依赖于该媒介的亲虾的依赖周期。野生。尽管取得了一些进展,在可以建立或获得此类SPF生产线之前,基于筛选的选择仍将是防止IHHNV对生产造成影响的唯一方法。 斑节对虾 在澳大利亚和其他地方也有同样的问题。

可以在以下网站在线找到本文的补充数据 //doi.org/10.1016/j.aquaculture.2018.09.032.

可从第一作者或原始出版物获得参考。


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