有关世界上发展最快的产业之一水产养殖发展的新闻报道和技术文章。

印度WSSV的PCR诊断的培训和统一

S.V.博士Alavandi博士 Joseph Sahaya 拉詹博士 Biju 那拉雅南博士 S.K.博士奥塔 M. 波尼玛博士 K.K.博士维贾扬

对主要虾类养殖业的关键支持

SPF L. vannamei的引进为印度虾养殖业的强劲发展提供了支持,但也导致养殖者放弃使用PCR检测多种疾病。 Darryl Jory摄影。

在过去五年中,印度的水产养殖产量已大大提高,尤其是在引进太平洋白虾(凡纳滨对虾)。养殖虾产量几乎翻了三倍,从南美白鲑前的2009年的13万吨增至2014-15年的35万吨。进口的无特定病原体(SPF)亲本和优质种畜的到来为印度苦咸水养殖业提供了急需的动力。

在所有利益相关者的共同努力下,金奈成立了水生检疫设施(AQF),农业和农民福利部(MoA&FW),沿海水产养殖局(CAA),海产品出口发展局(MPEDA),拉吉夫·甘地水产养殖中心(RGCA),印度农业研究理事会(ICAR)-CIBA和该行业自此以来一直发挥着重要作用。 2009年推出的年份。

生产集约化和新出现的疾病问题

然而,印度对虾养殖的逐步集约化加剧了流行病,疾病问题正在影响产量。 CIBA在印度国家水生动物疾病监视计划(NSPAAD)下进行的工作揭示了该疾病的出现是由印度虾养殖场中由戊型肝小肠肠杆菌(EHP)引起的虾肝胰微孢子病。

在那里,这种寄生虫与养殖虾生长迟缓和相关产量下降有关(Rajendran等人,2016年。养殖场中EHP的出现 南美白对虾(Litopenaeus)vannamei 在印度。水产养殖454:272-280)。

此外,研究还显示,由白斑综合症病毒(WSSV)引起的白斑病(WSD)仍然是养殖虾的主要杀手,尤其是在主要虾类生产州,如安得拉邦。另一个有趣的发现是养殖虾中感染性皮下和造血坏死(IHHN)的发病率增加。诸如慢性死亡综合症(CMS,通常被称为虾农称为运行死亡综合症,或虾农的RMS),白色粪便综合症(WFS)和白色肌肉综合症(WMS)等综合症的出现也加剧了养殖虾的发病率和死亡率。印度。

考虑到控制疾病的可用治疗方法有限,只有使用敏感和特定的诊断工具进行及时,早期的疾病检测,积极的疾病监测以及适当的健康管理措施,才是解决现有疾病和新出现疾病问题的实用方法。在微咸水养殖中。

直到2008年,印度大多数农民都对黑虎虾进行了测试(斑节对虾),然后在池塘中使用商业实验室中的聚合酶链反应(PCR)作为WSSV的种子。这种做法有助于控制WSSV在饲养系统中的引入,并成功地管理了黑虎虾作物。

但是,在2009年印度引进了外来的,无特定病原体(SPF)的太平洋白虾后,养殖者放弃了对虾种子进行PCR筛选的做法,这可能是因为他们误认为种子来自SPF种群,而且PCR不需要测试。

直到2008年,印度大多数农民在池塘放养之前使用商业实验室中的聚合酶链反应(PCR)对黑虎虾种苗进行了WSSV测试,这有助于控制白斑病毒的引入。 Darryl Jory摄影。

相反,疾病监测程序显示了WSD,EHP,IHHNV和其他综合征的高患病率。在这种背景下,考虑到与WSSV相关的农作物歉收的增加趋势,CIBA是咸淡水水生动物疾病(NRLD)的国家转诊实验室,意识到在种畜放养前需要筛查WSSV。

该计划与沿海水产养殖管理局(CAA)和拉吉夫·甘地水产养殖中心( RGCA)隶属于中央政府机构海产品出口发展局(MPEDA)。 聚合酶链反应诊断测试需要重要的技能和验证能力,以确保尽可能高的灵敏度和特异性,以便为农民提供可靠,优质的PCR测试服务。

环试验,PCR诊断的统一

环形测试的目的之一(也称为实验室间性能测试)之一是向农民或监管人员保证所提供的结果准确而具体(Pantoja等人,2011年。环形测试比较诊断实验室的PCR结果。 全球水产养殖倡导者,2011年5月-6月:36-37)。根据环试验后批准的私人PCR实验室提供的PCR检测服务的结果,这将有助于农民更好地选择种子种群,并在成长期养殖过程中做出适当的管理决策。

参加动手,PCR培训计划的参与者。

聚合酶链反应环测试的另一个目的是确定所使用的测试方法是否可靠且可重复。 聚合酶链反应实验室之间缺乏统一的实验室结果和共识,因此需要更多地关注标准化和统一化。参与实验室将在向该国水产养殖者提供准确的诊断服务方面发挥重要作用。这项努力将大大有助于该国的疾病预防和水产养殖部门的可持续性。

第一个PCR环​​试验是2005年由ICAR-CIBA钦奈在印度进行的,该试验名为 “ 聚合酶链反应在亚洲地区改善虾类健康管理中的应用” 在印度,印度尼西亚,泰国和澳大利亚与澳大利亚的ACIAR,CSIRO和AusVet Services等主要合作伙伴一起实施; MPEDA,CIBA和印度芒格洛尔水产学院;泰国的Mahidol大学,BIOTEC和FAO-NACA;印度尼西亚海洋事务和渔业部。

从私人和政府提供PCR服务的实验室,孵化场和研究机构总共收到了46份申请。其中,安得拉邦和泰米尔纳德邦虾类养殖区的21个实验室成功完成了PCR环试验。 ICAR-CIBA和MPEDA于2009年进行了第二轮PCR环试验,共有34个实验室参加,有31名参与者提供了结果-21个实验室在2009年成功完成了第二轮PCR环试验。

聚合酶链反应培训和2017年环测试

CIBA启动了涉及CAA,监管机构和RGCA的环网测试过程。 CAA邀请参加环测试的意向书(EOI),并通过在报纸上以及CAA,CIBA和RGCA的网站上的广告广泛宣传。

练习包括三个阶段。在第一阶段,通过CIBA和RGCA的团队检查,建立了各个实验室可用的PCR基础设施。随后在2016年10月3-5日为CIBA的实验室技术人员进行了动手培训课程,包括为期三天的PCR培训,包括有关核酸,WSSV,EHP和RNA的PCR原理和实践的理论和实践课程病毒,传染性心肌坏死病毒(IMNV)。向受训人员提供了培训手册,除了有关问题的章节外,还提供了有关重要虾病,核酸和PCR基础知识,虾采样,核酸提取,PCR,电泳和PCR结果报告等方面的综合信息。 -射击。

成功的虾类养殖业必须具有正确使用诊断测试的能力,以做出快速,及时,审慎和具有成本效益的管理决策,并确保养殖过程中仅使用无病原体和健康的种畜。

“环形测试”的最后阶段包括样品分配和参与实验室提交的结果评估。每个实验室都配备了由WSSV阳性和阴性样品组成的四个编码组织样品组成的小组,这些样品在95%的乙醇中固定,以便在2017年1月的第一周进行测试。参加环试验是自愿的,实验室可以自由使用他们选择的协议。提供了标准的报告格式,并给了实验室最多五个工作日的时间来分析样品并提交结果。为使报告被认为完整,应包括引物组或商业试剂盒,提取方法,PCR条件和凝胶照片。预期采用实时PCR的实验室将色谱图包括在报告的结果部分中。

结果是保密的,并且仅通过特定的代码提供给参与者,只有个别实验室和节点机构,ICAR-CIBA和RGCA才知道。由于环测的目的不仅在于确定熟练程度,而且在于帮助提高性能,因此还向那些遇到分析问题的实验室提供了反馈,以便他们可以为农民提供优质的服务。

共有25个实验室(包括泰米尔纳德邦的8个实验室,安得拉邦的11个实验室,卡纳塔克邦的3个实验室和古吉拉特邦的3个实验室)参加了2016-17年的环环测试。 25个实验室中有24个进行了测试并提交了结果。共有71%(17/24)的实验室获得4分,并且通过正确诊断所有四个样品通过了环试验(图1)。

在其余的实验室中,有17%(4/24)的实验室得分为3,并且由于错误地诊断了四个样本之一而未能通过环形测试。 8%的实验室由于错误地诊断了四个样本中的两个而得分为2,并且在环测试中未通过;而有4%(1/24)的实验室由于错误地诊断了四个样本中的三个样本的结果而得分为1并在圆环测试中失败。

在使用商业诊断套件的13个实验室中,有11个实验室(例如带有POCKIT系统的IQ Plus™WSSV套件,IQ 2000 qRT 聚合酶链反应以及其他实时PCR套件)提供了正确的诊断。但是,使用常规的巢式PCR方案和其他试剂盒,正确诊断的成功率较低(11个中的6个,约占54%)。

图1.由PCR实验室获得的由ICAR CIBA Chennai在2017年环测试期间诊断WSSV的分数(17个实验室得分为4,并且通过正确诊断所有四个样本通过了环测试;得分为3、2和1的实验室在环测试中未通过错误地诊断四个样本中的一个,两个和三个)。

观点

印度的水产养殖业一直在增长,对于虾类养殖而言,使用无病原体优质种子已成为虾类养殖成功和可持续发展的重要因素; R已向利益相关者和农民表达了这一点&D机构,例如CIBA和Govt。诸如CAA之类的机构。

可以提供高质量诊断支持的高质量诊断服务实验室的数量必须在私营部门增加,以满足不断增长的对虾养殖部门的需求。虾类养殖成功与否取决于水产养殖者的正确选择和诊断方法的正确使用,以做出快速,审慎和具有成本效益的管理决策,而无病原体健康种子的储存对成功收获作物至关重要。

环形测试和诊断服务的协调必须是一项持续不断的工作。在成功完成每个环形测试的最后,CIBA-CAA-和RGCA-MPEDA会共同评估结果,并通知符合认可标准水平的私人实验室。此外,为了维护农民的利益,ICAR-CIBA和畜牧业部奶牛场& Fisheries (DAHD&F), under the MoA&FW批准的用于咸淡水水产养殖的疾病诊断诊断转诊实验室,应负责私人实验室的诊断服务的维护和验证,农民可以在任何时间向转诊实验室寻求建议。